本发明公开了一种具有表面波导的单模光纤、SPR生物传感器及制备方法，该单模光纤包括：构成全反射条件的纤芯和包层，其中，包层包覆纤芯，且包层内包含表面波导，该表面波导贴近包层的表面，且表面波导采用飞秒激光直写波导技术写制，表面波导用于产生激发SPR效应的强倏逝场，不会破坏光纤的物理结构，使得单模光纤具有较强的机械强度，且由于单模光纤内包含表面波导，使得能够将光纤纤芯内的光波能量引导至光纤表面，产生强倏逝场，且制作简单，激发效率高，进一步的，包含上述单模光纤的SPR生物传感器也将避免物理结构被破坏，机械强度低的问题，其还具有激发SPR效应的效率高，制备工艺简单等优点。