本发明涉及一种针对纯度不高的试样测定其杂质衍生物色谱响应相对质量校正因子的方法，在进行衍生化反应时，通过冷凝回收等措施使衍生化前后物质的总质量损失控制在0.1％以内，在加标称量、稀释的步骤中，控制每一步过程的相对误差在0.1％以内，即在计算理论质量分数时，不仅要考虑加入的杂质标样衍生物对该杂质衍生物理论质量分数的贡献，而且要考虑试样衍生物中已有的该杂质衍生物对该杂质衍生物理论质量分数的贡献，以色谱测得的该杂质衍生物的面积归一化表观质量分数作为横坐标，作拟合后的直线，以该拟合直线的斜率作为该已知杂质的衍生物的色谱响应相对质量校正因子。这样可更准确地测定相应杂质衍生物的色谱响应相对质量校正因子。