本申请基因检测领域，公开了一种快速检测DNA的实时定量PCR的添加剂、试剂盒及反应方法。本发明所述添加剂由二甲基亚砜、甲酰胺、甘油、甜菜碱、Tween‑20、海藻糖组成，可以有效降低引物探针Tm值。本发明所述快速检测DNA的实时定量PCR，其反应体系含有所述的添加剂，引物Tm值在65‑70℃之间，探针Tm值在75‑85℃之间，反应程序为92‑95℃×1min‑3min；80‑85℃×5s‑15s，65‑75℃×10s‑22s，35‑45循环。通过优化PCR反应体系中引物探针Tm值和添加剂组分，减少PCR反应步骤，同时降低PCR不同步骤之间温度差，缩短PCR扩增时间，使PCR反应更加快速高效。