本发明公开了一种左旋多巴的生物合成方法，属于生物工程技术领域。本发明构建了包含酪氨酸酚裂解酶基因dhtpl的重组表达载体pJJ‑dhtpl，并实现了酪氨酸酚裂解酶在大肠杆菌BL21中的高效表达。利用表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌静息细胞，在16℃，pH7.5‑8.0，真空下可以将廉价的邻苯二酚和丙酮酸铵一步催化合成左旋多巴。左旋多巴难溶于水，在该反应体系中以晶体形式析出，反应进行彻底，主要反应物邻苯二酚的摩尔转化率达96％以上。表达有酪氨酸酚裂解酶的重组大肠杆菌静息细胞具有良好的催化稳定性，可以通过多次、分批添加邻苯二酚和丙酮酸铵，不断累积左旋多巴。本发明生产过程简单，原材料易得，产物易分离纯化，对于大规模工业化生产具有良好的应用前景。