本发明适用细菌分子遗传学技术领域，提供一种电感受态细胞的制备方法，包括：将菌种活化后，在培养基中进行8~24h培养；将所述菌种转接到预备含有所述培养基的发酵罐中，培养至OD值不低于2；将所述发酵罐中的菌液进行10~60min低温处理；将所述菌液转移到离心杯中，于温度为3~5℃、3000~8000rpm转速下离心，并倾去上清液；将沉淀重悬于冰预冷的溶液中，于温度为3~5℃、3000~8000rpm转速下离心，并倾去上清液，重复3~8次后，即得。本发明通过发酵罐中初始培养基体积的提高，带来的高密度培养环境，使细胞总数轻易的提高50倍以上，转化效率可达1010转化子/ug闭环DNA，使电感受态细胞的产业化发展成为可能，并显著降低了成本。