本发明公开了一种大肠杆菌诱导蛋白表达的发酵方法，属于生物技术领域。该发酵方法包括以下步骤：将待发酵的种子液接种于发酵培养液中，并置于0.05~0.1MPa的压力条件下进行恒温发酵培养6~10h后，得到发酵底液；往上述发酵底液中添加诱导剂；所述诱导剂在所述发酵底液中质量浓度为0.1~1.5mmol/L；往上述加有诱导剂的发酵底液中添加补料液，并继续进行恒温发酵培养20~48h，得到发酵产物；所述补料液与所述加有诱导剂的发酵底液的体积比为(0.5~2):1。本发明提供的发酵方法可以在36~40℃的环境下进行诱导蛋白的表达，其无需对发酵底液进行快速降温，也可以达到与降温到25~30℃的蛋白表达量，从而可以大大降低能耗以及节约生产成本。