本发明公开了一种大肠杆菌表达口蹄疫病毒样颗粒抗原的发酵培养基及培养方法，本发明中的发酵培养基包括基础培养基、补料用培养基和诱导表达用培养基，基础培养基能缩短生产用大肠杆菌菌种的迟缓期，使菌种尽快进入对数生长期；补料培养基能提高大肠杆菌对数生长期的增殖能力，保证大肠杆菌高密度发酵过程中具有更高的菌数；诱导表达用培养基能维持大肠杆菌平台期，以提高病毒样颗粒抗原的表达量，同时培养中的成分可促进抗原以可溶性形式进行表达。发酵培养方法包括：生产用菌种的培养、扩菌培养，诱导表达等多个环节，该发酵培养基及培养方法可大大提高病毒样颗粒的抗原表达量，同时可使抗原最大程度以可溶性形式进行表达。