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专利名称转导cas9基因到哺乳动物细胞进行基因编辑的方法
申请日2019-11-13
申请号/专利号CN201911105148.0
专利权人武汉华美生物工程有限公司
申请人武汉华美生物工程有限公司
发明人/设计人马峰;华权高;沈鹤霄;杨洁;陈莹;舒芹
公告日2020-01-14
公告号CN110684801A
法律状态审中
专利类型发明
行业分类生物工程

摘要

本发明提供了一种利用昆虫杆状病毒转导cas9基因到哺乳动物细胞进行基因编辑的方法,该方法通过构建含有gRNA、cas9、筛选标记的基因片段、哺乳动物细胞可识别的启动子、转录终止子序列的重组Bacmind质粒,并将其转染sf9细胞,包装获得重组杆状病毒,用其对哺乳动物细胞进行cas9的转导。利用杆状病毒可将大DNA导入哺乳动物细胞,降低cas9/筛选标记基因导入哺乳动物细胞的难度,本发明方法对于cas9的转导效率优异;本发明接近单细胞转导方法,无需反复大量稀释筛选即可找到成功编辑的克隆;所用携带有gRNA/cas9基因的杆状病毒,滴度高,易于保存、复制,可高效重复利用,便于开展相关工作。
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