本发明涉及病原体检测技术领域，特别涉及一种单管多重快速检测沙眼衣原体、淋球菌及解脲脲原体的荧光PCR试剂盒。该试剂盒包括PCR反应液、PCR启动剂、阳性质控品、阴性质控品；PCR反应液包括PCR加速剂、PCR缓冲物、检测沙眼衣原体的引物及探针、检测淋球菌的引物及探针、检测解脲脲原体的引物及探针、检测人GAPDH基因DNA的引物及探针、DNA聚合酶、UNG酶、dNTP、防腐剂；PCR加速剂由DMSO、Tween20和甘油组成；PCR缓冲物包括三(羟甲基)甲基甘氨酸和乙酸钾；PCR启动剂包括Mn(OAc)2、MgCl2和防腐剂。本发明试剂盒实现了灵敏度高、特异性强、操作简便、耗时更短的技术效果。