本发明提供一种检测牛C型流感病毒的引物对、试剂盒及其应用，属于生物工程和分子检测技术领域。所述引物对由引物F1和引物R1组成。采用本发明提供的引物对、试剂盒进行检测，检测方法简便快捷，重复性好，敏感度高，特异性强，可以实现大通量样品的检测，从而实现对牛C型流感病毒进行快速的、高敏感度的实时荧光定量PCR检测；便于基层操作和应用，对于牛C型流感病毒疫病诊断和流行病学调查具有重大的应用价值。