本发明涉及循环肿瘤细胞鉴定技术，尤其涉及一种基于免疫微球的循环肿瘤细胞明场负向鉴定方法，属生物工程技术领域。本发明采用的是利用免疫微球特异性识别白细胞，排除白细胞的干扰，从而负向鉴定出靶标细胞(循环肿瘤细胞)。克服了部分循环肿瘤细胞因其表面特征抗原EpCAM或CK低表达而无法实现有效正向鉴定的缺点，使靶标细胞(循环肿瘤细胞)的检出率更高。该方法利用抗原抗体特异性反应，直接在明场显微镜下观察细胞表面免疫微球的结合情况，此方法可避免传统的循环肿瘤细胞荧光检测方法必须依赖荧光显微镜、检测成本高、染色流程长、信号易淬灭等问题。且操作费用低、装置易实现，为普通明场显微镜的实验室开展循环肿瘤细胞检测提供了可能。