本发明提供一种测定蛋白质或多肽相对含量的方法，所述方法将样品经过前处理成多肽样品后，往多肽样品中加入参考肽，进行液相色谱‑平行反应监测质谱测试，用参考肽做多肽样品定量输出值的归一化标准，得到所述多肽样品相对于所述参考肽的相对含量。本发明的有益效果在于(1)PRM相对定量实验流程简单易操作，能够普遍应用于常规的蛋白或多肽检测项目，不需要花费较长的优化步骤。(2)外加参考肽段不受样品内源性因素的干扰，且不受管家蛋白在不同实验处理条件下表达量不准确的影响以及多肽等样本实验设计的限制；(3)不需要额外合成同位素标记内参肽段，方法建立快速简便，投入小。