本发明提供了多种生产乳清酸的重组微生物以及利用重组微生物生产乳清酸的方法，这些重组微生物菌种含有一个或几个下列特征或全部特征，这些特征是：（1）乳清酸代谢途径中的磷酸核糖转移酶或乳清酸核苷单磷酸脱羧酶的合成减弱了或完全丧失了；（2）通过超表达参与乳清酸合成途径中的酶的五个基因来增加相应的酶量；（3）通过超表达从胞内转运乳清酸的转运蛋白编码基因来增加相应的转运蛋白。