本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及一种抗HSP90单克隆抗体及其应用。本发明利用HSP90蛋白作为免疫原免疫BALB/c小鼠，采用细胞融合技术将免疫成功的小鼠脾脏淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细胞相融合，筛选出能够稳定分泌抗HSP90单克隆抗体的杂交瘤细胞株，大量生产抗HSP90单克隆抗体。本发明得到的抗HSP90单克隆抗体具有高效价、高特异性、可大量生产的特点，抗HSP90单克隆抗体能够特异性的结合HSP90蛋白，减少了可能的交叉反应，试验结果可信度更大，可用于细胞的免疫学检测，具有广阔的市场前景，在制备以HSP90为靶点的生物学检测试剂中具有重要的意义。