本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及培养基组合及生产异亮氨酸的方法。本发明提供了的培养基中发酵培养基和种子培养基的组分合理，补料培养基能够在发酵培养基中氮源营养开始不足时，通过匀速流加以一定比例配置的玉米浆和水解液(豆粕水解液或玉米浆水解液)的混合液，及时补充氮源，提高了异亮氨酸的生成速率及产量，且由于水解液(豆粕水解液或玉米浆水解液)所含生物素很少，避免了菌体量的过量增长，维持了较高的转化率。该方法简单易行，异亮氨酸生产水平得到显著提高，50L罐水平发酵产酸可达45.5g/L。