本发明提供了一种茶树菇纤溶酶及其制备方法，涉及生物工程技术领域，所述茶树菇纤溶酶由两个亚基A和B组成，亚基A的分子量为31.4kDa；亚基B的分子量为21.2kDa；亚基A的N端的十二个氨基酸序列如SEQIDNo.1所示；亚基B的N端的十二个氨基酸序列如SEQIDNo.2所示。本发明提供的纤溶酶最适作用温度为47℃；在人体生理pH时能保存较好的活性，不同浓度Fe2+对茶树菇纤溶酶表现出明显的抑制作用；具有良好的溶栓性能，使用上安全性好，制作成本低廉，为在制备溶栓药物和/或功能食品中的应用提供了一定的研究基础，也为茶树菇的综合利用提供了一个新途径。