本发明涉及生物工程技术领域，具体涉及肾癌舒尼替尼耐药的细胞系及其构建方法与应用。本发明通过取对数生长期的786‑O细胞接种在含10％胎牛血清的RPMI‑1640培养液中，采用体外逐步增加药物浓度法，历时六个月，最终获得了可以在含有20μM/LSun的培养体系中稳定生长、传代的786‑O‑Su细胞系。本发明得到的肾癌舒尼替尼耐药的细胞系能更好的模拟临床药物耐药，为研究肾癌靶向药物耐药机制、逆转肾癌细胞耐药性及开发和评价新的抗癌药物提供了重要的平台，且本发明的构建方法操作简单，成本较低，可以为其他耐药细胞系的构建提供参考。