本发明提供了一种全细胞催化合成1‑羟基‑2‑丁酮的方法，属于生物工程技术领域。本发明通过对甲醛裂合482氨基酸的定点饱和突变，构建突变库，筛选获得一株含甲醛裂合酶FLS的工程菌株。以该菌株为全细胞，以甲醛、正丙醛为原料，全细胞催化合成1‑羟基‑2‑丁酮。该菌株能够将1分子的甲醛和1分子的丙醛在甲醛裂合酶的作用下生成1‑羟基‑2‑丁酮。该方法只需一步即能完成1‑羟基‑2‑丁酮的合成，且反应条件温和原料广泛易得，成本低廉。