本发明公开了一种快速检测药敏的方法，包括以下步骤：第一步，用营养肉汤和抗菌药物进行混合，配制成浓度呈梯度变化的抗菌药物稀释液；第二步，用超纯水配制待检测菌株的标准菌悬液，再用肉汤稀释后备用；第三步，在第一步配制的抗菌药物稀释液中分别加入等体积的经肉汤稀释的标准菌悬液混匀，得到的混合液按照抗菌药物稀释液的浓度梯度依次滴加于质谱仪样品靶板上点样，点样完成后孵育2.0～5.0h；第四步，孵育完成后，弃肉汤，晾干，滴加质谱鉴定前处理试剂，结晶后用质谱仪进行微生物鉴定并判读结果。本发明方法前处理操作简单，能够更快速的直观地给出准确的药敏结果，给临床及时指导合理用药提供一定的参考。