本发明公开了属于外泌蛋白检测技术领域，特别涉及一种动态检测单细胞外泌蛋白分泌情况的方法，其包括以下步骤：抗体固定化、封闭、特异性捕捉生物样品、连接核酸标记检测抗体、显现荧光斑点、荧光斑点的显微切割、核酸片段的酶切、纯化和扩增、核酸片段的检测分析。本发明的检测方法将Elispot和核酸序列分析进行结合形成ELISEQ方法，具有高灵敏度、非特异结合少、高通量、高准确度等技术特点，能够同时实现数十甚至上百个指标的检测，操作简便，具有良好的应用前景和较大的市场需求。