本发明公开了蛋白拨动开关的构建及其在混合糖发酵生产木糖酸的应用，属于生物工程技术领域。本发明构建的蛋白水平拨动开关，由于调控发生在蛋白水平，原理是蛋白酶触发的切割和诱导降解，其响应时间短，调控精度高。利用本策略，当底物中葡萄糖与木糖浓度比值大于1时，可以有效缓解碳代谢阻遏现象。当葡萄糖：木糖的比例为2:1时，引入拨动开关可较对照组提高木糖酸产量0.79倍。利用该工具，以廉价纤维素水解液为底物生产高附加值化学品时具有较好的应用前景。