本发明提供一种膀胱原代神经元的分离提取方法，涉及生物工程技术领域，本发明将膀胱体洗涤剪碎后，依次用二型胶原酶和胰蛋白酶进行消化，所得消化物细胞过滤后，将过滤液接种在神经元完全培养基中培养，从而分离得到膀胱原代神经元。本发明提供的方法通过对取材、消化和培养方面的优化，成功的从膀胱体中分理处膀胱原代神经元，能实现利用多种方法进行镜检鉴定，很好的保证了膀胱原代神经元的细胞活力，满足以大鼠膀胱原代神经元细胞为试验对象的试验需求。膀胱原代神经元的成功分离提取可为进一步展开膀胱神经源性病变的研究奠定基础。