本发明涉及微生物工程技术领域，具体是一种混合益生菌制剂及其制备工艺。该工艺将植物乳杆菌、屎肠球菌和丁酸梭菌三种益生菌依据菌种类型制定出两级混合培养方案，并使用兼顾三种益生菌营养需求的混合发酵培养基，使得两类益生菌在混合培养过程中能够表现出明显的互惠共生关系，从而有效提高三种益生菌的生物量以及丁酸梭菌的芽孢率，并且生产成本相对较低。该制剂对应的益生菌组合对于常见的肠道致病菌具有明显的抑菌活性，应用于饲料后能够明显改善动物的平均日增重量和料重比。