本发明公开一种测定酸奶中氨基甲酸乙酯含量的检测方法，在酸奶前处理过程中先进行蛋白沉淀再过萃取柱萃取，后应用气相色谱‑正化学源‑三重四级杆质谱联用技术，用外标法检测酸奶中氨基甲酸乙酯含量，该方法高效、准确、选择性强、灵敏度高，可满足实验室内高通量酸奶中氨基甲酸乙酯含量检测需求，为酸奶中氨基甲酸乙酯的检测和防控提供高效可靠技术手段。