本发明提供了一种鱼油油脂中不皂化物和油脂酯类型检测方法。该检测方法包括：配制鱼油油脂溶液；采用高效液相色谱法对油脂溶液进行测定，其中测定的色谱条件包括：色谱柱选用硅胶柱、氨基柱或氰基柱中的任意一种；流动相为正己烷与异丙醇的混合物。本申请利用设定液相色谱检测的色谱柱和流动相，二者相互匹配使得鱼油油脂中的不皂化物与其它成分分离，且其它成分中的部分不同酯类型的油脂也可以被分离，进而在检测时得到相互独立完全的特征峰，完成了对不皂化物和不同鱼油油脂酯类型的检测。由此可见，本申请不需要对油脂进行皂化、萃取等操作，简化了检测流程，缩短了检测时间，且不存在皂化不完全导致的误差。