本发明公开了属于生物工程领域的Bar单抗杂交瘤细胞株、产生的抗体及其制备方法。本发明利用工程菌株表达、纯化得到的高纯度抗除草剂蛋白Bar作为抗原，通过杂交瘤技术制备了分泌抗Bar的特异、灵敏单抗的Bar单抗杂交瘤细胞株(PA1‑18030030/1B83D6)和Bar单抗杂交瘤细胞株(PA1‑18030030/6F51D2)，保藏编号依次为CGMCCNo.17083和CGMCCNo.17084。细胞株分泌单抗腹水纯化后得到的抗体间接ELISA效价分别为1:1024000和1:640000，抗体亚型均为IgG1，该单抗可以特异识别原核表达的重组Bar蛋白及转基因水稻中的内源Bar蛋白，分泌抗Bar抗除草剂蛋白的鼠单抗杂交瘤细胞株的构建为转基因水稻中该蛋白的检测提供了物质和技术支撑。