本发明公开了属于生物工程技术领域的一种用于转基因水稻抗除草剂蛋白Bar的胶体金免疫层析速测卡及其使用方法，所述胶体金免疫层析速测卡包括卡壳和卡壳内的试纸条，所述试纸条包括底板以及粘着在底板上依次相连的样品垫、金标垫、反应膜和吸水垫，所述金标垫包被抗除草剂蛋白Bar单克隆抗体‑胶体金结合物。该速测卡特异性强，灵敏度高，并且，操作简便、快速、准确，适用于转基因水稻及其产品中抗除草剂蛋白Bar的现场快速检测以及安全性评价。