本发明属于生物催化技术领域，具体涉及一种球形固定化含D‑泛解酸内酯水解酶细胞及其制备方法和水解D‑泛解酸内酯的方法。所述球形固定化含D‑泛解酸内酯水解酶细胞的制备方法，包含如下步骤：以海藻酸钠、明胶和聚乙烯醇为原料制备固定化载体，以含CaCl2的硼酸溶液为固化剂，固定化产D‑泛解酸内酯水解酶大肠杆菌得到固定化含D‑泛解酸内酯水解酶细胞。本发明的球形固定化含D‑泛解酸内酯水解酶细胞对D‑泛解酸内酯的选择性高，重复使用性好。