本发明提供了一种基于修饰鞘磷脂酶优化的HDL3比色法检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2，试剂R1：Tris‑HCl、PEG6000、BSA、Polyoxyethylenestyrenatedphenyletherderivative等；试剂R2：Tris‑HCl、PEG6000、mPEG‑SMASE2、Polyoxyethylenepolycyclicphenylether等。本发明还提供了一种基于修饰鞘磷脂酶优化的HDL3比色法检测试剂盒的制备与使用方法。本发明试剂盒可用于全自动生化分析仪分析，其成本低廉、自动化高，能大大节省检测时间；并且，相比同类产品，稳定性和灵敏度更高。