本发明公开了一种脂肪干细胞提取方法，属于干细胞提取技术领域。本发明脂肪干细胞提取的方法包括脂肪获取、洗涤、消化、清洗、裂解红细胞、终止裂解、培养、复种、传代及鉴定步骤。该方法中以细胞洗涤液对脂肪组织进行反复洗涤，有效去除脂肪油滴；以消化酶消化细胞间质中的胶原纤维释放细胞，对细胞损伤小，游离出的细胞在间充质基础培养基中保持细胞的活性；对细胞培养瓶上清中未贴壁的细胞进行传代培养，提高了细胞的存活率，增加了细胞的增殖速度。本发明的提取方法，简便快捷；脂肪组织酶解彻底，各成分细胞被最大化释放；获得的脂肪干细胞存活率高。