本发明公开了一种高产透明质酸寡糖的重组枯草芽孢杆菌的构建方法，属于生物工程技术领域。本发明选择yoyJ‑yoyA、lytH、lytD、lytG、lytC作为整合位点，将途径基因glmM、glmS、glmU、tuaD和水蛭来源的透明质酸水解酶基因H6LHyal整合到枯草芽孢杆菌基因组中，不仅提高了透明质酸寡糖的产量，还提高了生物量、有利于后期进行透明质酸寡糖的分离纯化。在3L发酵罐发酵40h时透明质酸寡糖的产量达36.04g/L。其3L发酵罐水平的透明质酸平均分子量HAMw约为3.3×104Da。本发明为微生物系统高效发酵制备透明质酸寡糖奠定了基础，适合于工业化生产应用。