本发明提出一个全新的HBV‑cccDNA检测的策略，通过设计与HBV‑DNA序列中DR2区域下游配对的启动引物对HBV‑cccDNA正链进行基于通用碱基的插入替换的单链DNA扩增，得到含有通用碱基的新生的单链DNA，并依此设计与HBV‑DNA的DR2区域上游配对的选择引物，可以特异性结合该含有通用碱基的新生的单链DNA，且无法与HVB‑cccDNA负链结合，也无法与HBV‑rcDNA的任一条链结合，从而仅对HBV‑cccDNA的正链进行选择性扩增，而不扩增HBV‑rcDNA，实现了在对HBV‑cccDNA的特异性检测中避免了HBV‑rcDNA的干扰。