本发明属于生物工程领域，特别涉及一种产低温葡萄糖氧化酶的基因工程菌及其制备方法。产低温葡萄糖氧化酶的基因工程菌是以CGMCCNO.17228为出发菌株，通过基因合成获得基因，并构建表达载体pET28a‑GOD，将表达载体倒入大肠杆菌BL21构建获得所述的产低温葡萄糖氧化酶的基因工程菌E.coliBL21/pET28a。本发明还提供了所述产GOD的基因工程菌用于发酵生产GOD的应用。构建一种能大幅提高低温葡萄糖氧化酶产量、缩短发酵时间的基因工程菌，从而解决了现有野生菌株活力低，发酵时间长等缺点，具有广泛的工业应用前景。