本发明公开了一种检测非洲猪瘟病毒的分子探针、试剂盒及其应用，旨在解决现有检测技术可靠性和实用性差的技术问题。本发明检测非洲猪瘟病毒的分子探针的核苷酸序列如SEQIDNO.2所示。本发明配制了一种检测非洲猪瘟病毒的RT‑PCR反应液，制备了一种检测非洲猪瘟病毒RT‑PCR反应液冻干粉、一种非洲猪瘟病毒检测试剂盒，并提供了非洲猪瘟病毒的定性和定量检测方法。本发明设计的分子探针及建立RT‑PCR检测方法具有敏度性高、重复性好、特异性强的特点，提高PCR技术检测ASFV的可靠性和易用性，实现无污染、高通量的检测，可用于检测易感动物及相关动物制品中ASFV核酸。