本发明公开了一种检测猪可食性组织中氟苯尼考总残留物的方法及应用。本发明方法包括：猪可食性组织匀浆经过高浓度盐酸溶液水解，乙酸乙酯洗涤，在碱性条件下由乙酸乙酯提取，提取物经过浓缩，正己烷脱脂，并以乙酸乙酯:丙酮:氨水的混合液作为展开液进行薄层色谱净化，再采用高效液相色谱进行检测。本发明充分释放了猪可食性组织中氟苯尼考结合残留物，并将其转化为氟苯尼考胺，避免了现有方法可能导致的“假阴性”结果。此外，本发明以薄层色谱净化组织提取液，有效地去除了组织中所含的内源性物质，避免了其对色谱分析的干扰，降低了检测成本，减少了有机溶剂的用量，结果可靠，适用于基层检测机构进行日常监控。