本发明提供了一种基于磁珠法的快速、不加热的核酸提取试剂盒，含有磁珠的溶液，蛋白酶K；polyA溶液；去蛋白液；洗涤液液；洗脱液；裂解液。本发明还提供了采用上述的试剂盒对核酸进行提取的方法，先加入裂解液和磁珠到样品中，充分震荡混匀，在裂解细胞释放核酸的同时用磁珠捕获核酸，然后分别采用特有的去蛋白液和漂洗液洗涤去除磁珠表面的蛋白质和盐离子等杂质，最后用特有的洗脱液在室温快速洗脱核酸。与常规的磁珠法核酸提取试剂盒相比，本发明的试剂盒步骤简便、快速，整个流程下来仅需要15min左右，而且不需要加热，降低了可能因为气溶胶造成样品间污染的概率；无氯仿苯酚等有毒试剂，安全无污染。