本发明公开了一种适用于末梢血免疫层析定量检测的试纸及其应用，包括底板，所述底板上沿底板长度方向依次设有样品垫、封闭垫、反应垫和吸水垫；其特征在于：所述样品垫上包被有第一抗体，所述第一抗体上带有示踪标志物且能够识别待测目标物一抗原表位；所述封闭垫上包被有抗红细胞抗体，所述封闭垫与所述反应垫部分层叠。本发明还包括了上述试纸在免疫层析检测盒的制备或末梢血免疫层析定量检测中的应用。与现有技术相比，本发明方案的试纸具有灵敏度高、线性范围宽等优点。