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专利名称一种利用改进的CRISPR-Cpf1进行基因装配的新方法
申请日2019-01-08
申请号/专利号CN201910015592.7
专利权人湖北大学
申请人湖北大学
发明人/设计人马立新;董梦洁;翟超;韩瑞;王亚平
公告日2019-05-31
公告号CN109825520A
法律状态审中
专利类型发明
行业分类生物工程

摘要

本发明公开了一种利用改进的CRISPR‑Cpf1进行基因装配的新方法,它是一种利用来自于FrancisellatularemianoticedU112菌株(土拉弗朗西斯菌诺维达亚种U112,基因序列号:MF193599)的DNA基因编辑酶FnCpf1进行基因重组克隆的方法。本方法在不影响FnCpf1切割效率的前提下,将crRNA(规律成簇的间隔的短回文重复序列转录产生的RNA序列)的种子序列从文献报道的23个核苷酸缩短为18个。同时选用oligo(dN)6(寡核苷酸六聚体)作为切割靶位点产生的粘性末端,克服了FnCpf1酶切后末端不均一的问题,从而显著提高外源DNA片段的装配效率,DNA片段装配效率达到85%左右。所述基因编辑酶FnCpf1可以用AsCpf1和LbCpf1等其它核酸编辑酶Cpf1代替。
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