本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种固定化胰蛋白酶的方法，包括将固定材料加入醋酸水溶液中；加入20‑30二氧化硅球；将第二溶液滴入氢氧化钠、乙醇的水溶液中；氢氧化钠溶液加热促进小球A中的二氧化硅溶解；取出小球B清洗；小球C放入甘油溶液中浸泡；小球D，置于烤箱中烘干；取小球E加入戊二醛溶液修饰表面基团，洗涤；将小球F固定、冲洗得到固定化胰蛋白酶。该固定化胰蛋白酶的方法选用的壳聚糖表面有大量的氨基，可在戊二醛的修饰下与酶分子交联；二氧化硅与热碱在壳聚糖小球内部产生孔道，增大了载体的比表面积，提高了单位质量载体的载酶量；使用的壳聚糖，二氧化硅，戊二醛，氢氧化钠，醋酸均为化学大宗商品，价廉易得。