本发明公开了一种FMD抗原增强培养基及其制备方法与应用，培养基包括：氨基酸、无机盐、维生素及水解物，还包括：细胞周期阻断剂、糖类、双肽及小分子肽；培养基的制备方法包括：称取、溶解、过滤并除菌等步骤；疫苗的制备包括:BHK‑21细胞的复苏、细胞的扩增培养、病毒接种、换液等工艺。本发明在现有技术的基础上，在培养基中加入了抗原增强因子即细胞周期阻断剂，并且在病毒培养的过程中，增加了一步换液工艺，提高了抗原的活性、增强病毒滴度，显著提高了疫苗的抗病毒效率。