本发明公开了一种心脏肌球蛋白结合蛋白C的定量检测方法，首先取抗体偶联超顺磁微粒与待测样本发生特异性结合反应，得到第一反应物，其中抗体偶联超顺磁微粒为超顺磁微粒与抗cMyBP‑C单克隆抗体A偶联得到的产物；然后取第一反应物与酶标物发生特异性结合反应，得到第二反应物，其中酶标物为酶与抗cMyBP‑C单克隆抗体B偶联得到的产物；最后取化学发光底物与第二反应物发生酶促反应，测定发光信号，获得cMyBP‑C的浓度值。本发明的方法学模式为夹心法，与cMyBP‑CELISA试剂盒相比，本发明的检测方法以及制备的试剂盒可大大提升其检测灵敏度和线性范围。通过对本发明制备的试剂盒进行方法学评价，其分析灵敏度为0.05ng/ml，检测范围0.1‑50ng/ml，与临床AMI患者具有较高的相关性和符合率。