本发明公开了一种温育时自封闭反应孔板，在该反应孔板的反应孔内预包被有石蜡类相变材料；其制备方法为：将市售反应孔板进行改性处理，提高各反应孔内表面的亲水性；选择熔点低于实验温育温度的低熔点石蜡，将石蜡高压灭菌后置于水浴锅中保持液态；根据孔板上各反应孔底面积的大小，用移液枪准确抽取石蜡油垂直加入反应孔中；待石蜡冷却凝固后，将反应孔板用铝箔袋密封，贮存在4~8℃冰箱中。本发明的优点在于制备方法简单，省时、省力，使用效果好。经改性处理的反应孔板大大增加了反应孔的亲水性，减少了疏水性，即减小了低熔点石蜡与反应孔底部的作用力，便于后续实验中低熔点石蜡融化后与孔底分离。