本发明公开了一种检测甲胎蛋白异质体AFP‑L3含量的试剂盒，包括生物素LCA，包被有甲胎蛋白抗体的磁微粒混悬液或包被板，辣根过氧化物酶/吖啶酯标记的甲胎蛋白抗体，辣根过氧化物酶标记/吖啶酯标记的链霉素及校准品。本发明试剂盒操作简单快捷，利用甲胎蛋白抗体磁微粒混悬液或甲胎蛋白抗体包被板对总AFP特异性结合，以及生物素化的LCA对AFP‑L3的强吸附性，形成夹心复合物，通过链霉素和生物素高亲和力放大效应，直接检测AFP‑L3的浓度。较与北京热景公司提供的检测AFP‑L3的试剂盒相比，无需多重繁琐步骤处理血清提取AFP‑L3，避免了提取AFP‑L3的繁琐步骤，节省时了间，检测更加方便快捷，且临床灵敏度、特异性较高，满足了临床检测需求。