本发明属于生物工程技术领域，具体涉及一种抗菌肽及其制备方法与应用。所述的抗菌肽是通过副干酪乳杆菌和马克斯克鲁维酵母混合菌株对牛奶进行发酵制得，主要包括以下步骤：(1)制备混合菌株发酵母液；(2)接种发酵母液进行低温长时间发酵制备乳清；(3)采用超滤技术分离乳清制得含抗菌肽的粗提取液；(4)通过凝胶层析纯化目的抗菌肽。本发明制得的抗菌肽热稳定性好，对人体无刺激作用且抗菌谱广，尤其对痤疮丙酸杆菌有显著抑制作用，可替代抗生素，有效减少抗生素的使用，可用于预防和治疗痤疮。