本发明公开了一种醇脱氢酶突变体及其在辅酶再生中的应用，属于酶工程以及生物工程技术领域。本发明的醇脱氢酶突变体是通过将出发氨基酸序列如SEQIDNo.1所示的醇脱氢酶的第84位缬氨酸和/或第127位酪氨酸进行突变得到的；此醇脱氢酶突变体对多种醇类辅底物(如1,4‑丁二醇、1,5‑戊二醇、1,6‑己二醇)均具有较高的活力，可以催化这些醇类辅底物进行辅酶NADPH再生；且与野生型醇脱氢酶KpADH相比，其活性、催化效率更高，对辅底物1,4‑丁二醇的kcat值最高可达75.9min‑1，是野生型KpADH的7.3倍，kcat/Km值可达2009min–1·M–1，是野生型KpADH的14.7倍，Km值最低可为11.3mM，较野生型醇脱氢酶KpADH有了显著的降低，因此，本发明的醇脱氢酶突变体具有更高的工业应用价值。