本发明公开了一种5‑位含有羧基的类固醇衍生物的合成方法，包括下述步骤：第一步，在有机溶剂及碱存在条件下，以类固醇激素和丙二酸二乙酯为原料，在无水无氧环境中发生亲核加成反应，得到5‑位酯基取代的类固醇衍生物；第二步，在第一步得到的产物中加入盐酸溶液进行脱羧和酸化反应，反应结束后经分离纯化，得到生物纯度≥95%的5‑位含有羧基的类固醇衍生物。本发明的优点在于：所用原料易得，所有原料均可采用市售产品；整个反应操作简单，合成周期短，得到的产物收率高、构型单一。将得到的最终产物‑‑5‑位含有羧基的类固醇衍生物作为制备高血压诊断试剂盒抗原的原料，反应效果好，具有较高的经济价值。