本实用新型涉及一种多层培养且防污染的贴壁细胞培养装置，包括加热震荡器、培养瓶、回收瓶以及试剂瓶，加热震荡器上部安装一弹簧底座，弹簧底座上部水平放置培养瓶，培养瓶瓶口密封安装瓶盖，瓶盖朝向一侧，瓶口密封安装一加液管和一回收管，回收管端部位于培养瓶底部，加液管连通连接五通管，五通管另外四个连接管分别连接一个试剂瓶，在连接管上安装控制阀，回收管连通连接三通管，三通管另外两个连接管分别连接一个回收瓶，在连接管上安装控制阀。本申请提供的细胞培养装置的培养瓶有5层细胞培养层，几乎是普通培养瓶培养细胞数的5倍，方便大批量细胞的培养，在细胞培养过程中节约了各种试剂、耗材，节省了CO2培养箱的空间。