本发明公开了一种转化L‑苏氨酸生产L‑2‑氨基丁酸的重组菌的构建及应用，属于生物工程技术领域。本发明所述的生产方法利用一种表达双质粒的重组菌，同时实现三种酶的高效表达，将L‑苏氨酸转化为L‑2‑氨基丁酸，并偶联一辅酶再生体系，通过将NAD+转化为NADH，使得NADH在体系中浓度相对稳定，转化能够高效进行。更进一步地，在此过程中由甲酸铵转化而来的CO2可溶于转化体系中生成的氨水，对环境污染小，有工业化应用价值。本方法具有转化条件温和、专一性强、成本低廉、转化时间短等优点。采用本方法制备L‑2‑氨基丁酸，投入40g/LL‑苏氨酸，所得产物L‑2‑氨基丁酸的浓度为43.3g/L，转化率达99.9％以上。