一种兽用发酵蛹虫草菌口服液的制备方法，涉及中药发酵类禽药，依次进行以下步骤：A种子液制备：制备种子培养基，进行灭菌后备用；挑取蛹虫草菌菌种进行接种，摇床培养后得到蛹虫草菌种子液；B发酵罐放大：取A步骤中的蛹虫草菌种子液接种到发酵培养基中，调节pH值，灭菌；当发酵培养基降温至23℃时，所述蛹虫草菌种子液按照发酵液体积百分比为5‑12%的量在无菌条件下接种，培养72‑96h；最终得到发酵蛹虫草菌混合液体；C离心固液分离：离心后得到上清和沉淀，备用；D取离心后的上清液灭菌、检查和罐装。本发明的有益效果是：将生物工程发酵技术结合中药特定培养基筛选技术，能够大幅度提高蛹虫草菌发酵的活性物质虫草素的含量。其中虫草素含量≥200μg/ml。