本发明公开了一种用于早期乳腺癌多联检测的荧光免疫层析检测卡、试剂盒，其中包括试纸条和卡壳，试纸条由底板、样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组成，样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜和吸水垫依次搭接组装在底板上；吸水垫和结合垫分别交叠压在硝酸纤维素膜的两端，并在硝酸纤维素膜的表面形成检测区；样品垫交叠压在结合垫上；结合垫上喷涂羧基荧光微球标记的HE4单克隆抗体和CA153单克隆抗体，硝酸纤维素膜上包被HE4单克隆抗体、CA153单克隆抗体和羊抗鼠多克隆抗体，作为检测线T2、检测线T1和质控线C。本发明同时检测两种标志物，提高乳腺癌早期的检出诊断率，而且操作简单快速、检测成本低、对实验室实验设备及操作人员要求较低、缩短检测时间。